<<湖泊生態(tài)調(diào)查觀測與分析>>,中國標(biāo)準(zhǔn)出版社-藻類葉綠素的檢測方法

1.  方法要點:
葉綠素a的測定是監(jiān)測水體中浮游生物現(xiàn)存量,其方法簡便,快捷;其方法為一個常用的測定浮游植物現(xiàn)存量方法,而且,葉綠素a值通過一定的換算,也可指示初級生產(chǎn)量的大小.

2.  試劑
丙酮溶液: 90%的丙酮溶液;
濾 膜: 玻璃纖維濾膜Whatman GF/C或相應(yīng)的混合纖維酯微孔濾膜.(孔徑0.7μm) 【這里孔徑0.7UM 其實是指 whatman GF/F 而GF/C 孔徑是1.2UM】

3.  儀器設(shè)備
752型分光光度計;抽濾裝置;離心裝置

4.  測定步驟
4.1  水樣的保存
通常我們采集深度為0.5m和1m的混合水樣2L左右,注入水樣瓶中,于陰暗處保存,如果
水樣不能及時處理,應(yīng)放在低溫(0-4°C)下保存;
4.2  抽濾
搖勻水樣并準(zhǔn)確量取水樣0.1-1L(取樣體積視水樣中浮游植物的多少而定).在濾器上放入濾膜,將水樣倒入濾器中抽濾,并沖洗量筒兩次,洗液一并倒入濾器,還應(yīng)注意不能在濾器壁上粘附浮游植物,一并用洗瓶沖下.抽濾完畢后,用鑷子取下濾膜,將其對折(有浮游植物的一面朝內(nèi)),再用普通濾紙吸壓,盡量去處濾膜上的水分;置于黑暗低溫條件下保存.如需保存較長時間(30天)的話,則應(yīng)置于-20°C下.
4.3  提取
樣品先經(jīng)過研磨可以提高其色素提取效果.將濾膜剪碎,放入研缽,加入2-3ml90%的丙酮
提取液,充分研磨至糊狀.將研磨好的樣品倒入離心管中,用少量丙酮沖洗研磨用具,洗液也倒入離心管中,使*后的體積不超過10ml..蓋上塞子置于4°C冰箱中過夜抽提,時間為20-30小時
4.4  離心
將裝有提取液的離心管平衡后放入離心機(jī)中,轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)為4000rpm,時間為10min,將上清
液轉(zhuǎn)入定量比色管中,再用少量90%的丙酮溶液沖洗底部沉淀,搖勻后再次離心,上清液并入比色管中*后定容至10ml.如果有大批樣品需立即同時處理,可省去研磨離心步驟,直接在提取液中浸泡24-36h,取清液測定.
4.5 比色
先用少量丙酮溶液潤洗光程為1cm的比色皿.讀取波長為665nm和750nm兩處的光密度.注意使提取液在665nm處的讀書應(yīng)在0.1-0.8之間;750nm處讀書在0.015以下.然后再加入1滴1mol/LHCl溶液至比色皿中,待充分酸化后(1-2min)再測665nm和750nm處光密度值.

5.結(jié)果計算

Chla=(Eb-Ea)xRxKxVe/(R-1)xVxI

其中:Chla —-水樣中葉綠素a的含量,mg/m3或者μg/l;
Eb —-提取液酸化前665nm和750nm處光密度差;
Ea —-提取液酸化后665nm和750nm處光密度差;
R —-*大酸比,R=Eb/Ea.目前采用R值為1.7;
Ve —-提取液的總體積,10ml;
V—-抽濾水樣的體積,L;
I —-比色皿的光程,1cm;
K—-葉綠素a在665nm處的比吸光系數(shù)的倒數(shù)乘以1000,在丙酮提取液中的比吸光系數(shù)為89,故K=1/89*1000=11.24.