銀杏葉黃酮醇甙的樹(shù)脂法純化(D101樹(shù)脂與層析用聚酰胺樹(shù)脂混合使用)
國(guó)內(nèi)外的銀杏葉制劑有Tanakan, Tebonin, Forte,Ginkgogink,Craton, Duophan, 天保寧，百路達(dá)，銀可絡(luò)等。德國(guó) Schwabe公司和法國(guó)Ipsen公司生產(chǎn)的銀杏葉制劑是有具體規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)的銀杏葉提取物GBE761，其中黃酮醇甙（1）含量≥24%，銀杏內(nèi)酯（2）≥6%，銀杏酸≤100ppm。國(guó)內(nèi)制藥行業(yè)所用GBE的質(zhì)量，一般（1）≥24%，（2）為2%--3%。GBE在食品飲料，化妝品等方面應(yīng)用的質(zhì)量基本要求為（1）≥20%，原花色素≤10%，烷基酚≤10ppm, （2）的指標(biāo)因具體品種要求而定。
目前，國(guó)內(nèi)多采用青葉為原料制備，工藝上采用溶劑法和樹(shù)脂法。前法是通過(guò)有機(jī)溶劑（乙醇，丙酮，甲醇等）浸泡葉子，過(guò)濾，水析，濃縮為銀杏浸膏，產(chǎn)率約12%---15%，（1）的含量3%--5%，再經(jīng)液-液萃?。ǘ燃淄椋确?，乙醚，丁酮，乙酸乙酯等），產(chǎn)率約0.8%--1.0%, (1)的含量15%--18%。樹(shù)脂法采用大孔吸附樹(shù)脂，聚酰胺等對(duì)（1）進(jìn)行吸附和解附，產(chǎn)率1.0%--3.0%, 含量10%--28%。
提取
取黃葉500g, 破碎至大小0.5--1.5cm, 加45%乙醇水溶液，葉重(g)與溶劑體積比(ml)為1:6--1:8, 回流2h。共提取兩次，合并提取液5.4L?；厥找掖?，濃縮液用水稀釋至3L。取樣進(jìn)行HPLC分析。固溶物提取率為20.9%, 黃酮醇甙含量為2.12%, 提取率為方便用戶94%。
絮凝反應(yīng)
絮凝劑用量為40--50ml, 加入到3L提取液中，攪拌，產(chǎn)生大量絮狀沉淀。離心過(guò)濾，濾液為澄清透明液體，固溶物為15.6%，（1）含量 為2.57%.
PH沉降
用0.5mol/L NaOH溶液，調(diào)節(jié)上述澄清液PH至8.5---9.0, 產(chǎn)生絮狀沉淀。離心過(guò)濾，濾液用0.5mol/L HCl 溶液調(diào)PH至6--7。其固溶物為14.2%, 含量為2.54%。
樹(shù)脂吸附
取D101樹(shù)脂和聚酰胺樹(shù)脂約400g, 體積比為1:1, 體積為1000ml, 混勻裝柱。將經(jīng)絮凝，PH處理的澄清液約3L, 上混合固定床。樹(shù)脂的吸附量約為3.0g/100ml。以3--4倍柱體積的水洗，然后以70%乙醇解吸，經(jīng)濃縮，干燥得到產(chǎn)品6.4g, 相對(duì)葉重得率為1.28%, (1)含量為25.1%.
討論
1 提取劑的選擇
目前，有丙酮-水，乙醇-水和水等幾種溶劑作為提取劑。以丙酮提取時(shí)，葉綠素等含量高；水提取或低濃度乙醇提取時(shí)，水溶性雜質(zhì)多，（1）提取率低；高濃度乙醇提取時(shí)，烷基酚，原花色素等醇溶性物質(zhì)含量高。經(jīng)優(yōu)選，用45%乙醇水溶液提取，所得產(chǎn)品有害成份含量少，（1）的提取率在90%以上。
2 絮凝劑
絮凝劑為合成的高分子聚合物，能使蛋白質(zhì)變性，產(chǎn)生沉淀。沉淀呈棉絮狀，因而使（1）等被包裹而引起損失。添加1%--2%的絮凝劑，能使溶液中的固溶物下降5%--6%, 黃酮損失率為9.48%。
3 PH值調(diào)節(jié)
溶液PH調(diào)至8.5--9.0時(shí)，主要沉降原花色素。原花色素與(1)的紫外吸收波長(zhǎng)相近，因而比色法分析（1）含量偏高。HPLC法采用酸水解，C18柱展開(kāi)，能避免原花色素的干擾。原花色素對(duì)人體有一定的毒性，因而必須在GBE產(chǎn)品中控制其含量。經(jīng)PH酸堿處理，溶液中的固溶物下降約1.5%, (1)略有損失。
4 樹(shù)脂的選擇
D101和聚酰胺樹(shù)脂混合使用為國(guó)內(nèi)**。D101等大孔吸附樹(shù)脂對(duì)黃酮吸附率為6--7mg/lg樹(shù)脂，對(duì)固溶物的吸附率為2.2--2.5g/100ml, 因而對(duì)（1）選擇性差，得率為2.5%---3.0%, (1)含量 10%--16%。相反，聚酰胺樹(shù)脂對(duì)（1）吸附的選擇性高，對(duì)（1）吸附率為15--20mg/lg樹(shù)脂。產(chǎn)品得率低，一般小于1%，但（1）含量高達(dá)24%--30%。針對(duì)兩種樹(shù)脂的特點(diǎn)選用一定體積比（1:1)的混合樹(shù)脂，不僅能改善選擇性，而且產(chǎn)品得率提高1.3%, 黃酮醇甙純度大于24%.
5 樹(shù)脂再生
樹(shù)脂再生的好壞直接影響其吸附能力?？蛇x用0.4--0.6mol/L NaOH溶液和HCl溶液分別對(duì)混合樹(shù)脂進(jìn)行酸堿處理，*后以水沖洗至中性。
