黃曲霉**B1**親和柱 說(shuō)明書(shū) whatman 934-AH 上海摩速代理
黃曲霉**B1**親和柱
使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品用途】
黃曲霉**B1（AFB1）**親和柱適合于和AFB1酶免分析試劑盒、HPLC或液質(zhì)結(jié)合使用，定量檢測(cè)AFB1。用該**親和柱凈化樣品，提高了樣品的純度。純化后的樣品可用不同的分析方法測(cè)定。
【適應(yīng)范圍及產(chǎn)品性能】
用于定性、定量檢測(cè)谷物、糧油、飼料等樣本中AFB1時(shí)的樣本前處理。
柱吸附能力： ≥50ng/支，≥100ng/支 （可根據(jù)要求選擇相應(yīng)柱容量）；
回收率：75%~90%。
柱內(nèi)凝膠：Protein A瓊脂糖凝膠
特點(diǎn)：載量大，單抗定向偶聯(lián)，易洗脫，回收率高。
【測(cè)定原理】
本產(chǎn)品測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，黃曲霉**B1（AFB1）單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠介質(zhì)上，樣品中的AFB1經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過(guò)AFB1**親和柱，在**親和柱內(nèi)，AFB1與抗體結(jié)合，洗滌液通過(guò)**親和柱除去未被結(jié)合的雜質(zhì)。*后采用甲醇洗脫AFB1，然后進(jìn)行相關(guān)分析。
【產(chǎn)品組成】
標(biāo)準(zhǔn)品（選配）；
25支/盒；1mL柱管/支；
說(shuō)明書(shū)1份；
【所需材料】
（1）設(shè)備及器皿耗材：天平、粉碎機(jī)、離心機(jī)、高速均質(zhì)器（18000r/min~22000
r/min）；量筒、50mL玻璃漏斗、微量移液器（100μL~1000μL）、定量濾紙、玻璃微纖維濾紙（直徑11cm，孔徑1.5μm whatman 934-AH 1827-110）、20mL玻璃注射器等。
（2）試劑：甲醇（色譜級(jí)）、pH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）、pH7.0磷酸鹽緩沖液（PBS）、吐溫-20、蒸餾水或去離子水。
【樣品制備及凈化】
（1）谷物、花生及其制品
----準(zhǔn)確稱取25.0g粉碎的樣品，加入5.0g氯化鈉，
----與125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min，
----用定量濾紙過(guò)濾，
----準(zhǔn)確移取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，備用。
----準(zhǔn)確移取15.0mL混合液進(jìn)行過(guò)親和柱。
（2）醬油
----準(zhǔn)確稱取50.0g樣品， 加入2.5g氯化鈉，
----加入甲醇-水溶液（8+2）至100mL，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min，
----用定量濾紙過(guò)濾，
----準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入40.0mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，備用。
----將濾液調(diào)至PH為中性。
----準(zhǔn)確移取10.0mL混合液進(jìn)行過(guò)親和柱。
（3）醋
----準(zhǔn)確稱取5.0g樣品，加入1.0g氯化鈉，
----用pH7.0的磷酸鹽緩沖液稀釋至25.0mL，混勻，
----用定量濾紙過(guò)濾，
----加10.0mL濾液加入10.0mL pH7.0的磷酸鹽緩沖液，混勻，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾至濾液澄清，備用。
----將濾液調(diào)至PH為中性。
----準(zhǔn)確移取10.0mL混合液進(jìn)行過(guò)親和柱。
（4）植物油脂
----準(zhǔn)確稱取25.0g樣品，加入5.0g氯化鈉，
----加入甲醇-水（7+3）至125.0mL，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min，
----用定量濾紙過(guò)濾，
----準(zhǔn)確移取15.0mL濾液加入30.0mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，備用。
----準(zhǔn)確移取15.0mL混合液進(jìn)行過(guò)親和柱。
（5）草藥、香料及茶葉
----準(zhǔn)確稱取25.0g粉碎的樣品，加入5.0g氯化鈉，
----與125.0mL甲醇-水溶液（7+3）混合，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min，
----用定量濾紙過(guò)濾，
----準(zhǔn)確移取10.0mL濾液并加入30.0mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過(guò)濾，至濾液澄清，備用。
----準(zhǔn)確移取20.0mL混合液進(jìn)行過(guò)親和柱。
【親和柱凈化】
注意：整個(gè)純化過(guò)程盡量不要讓柱子干燥！
----將柱子上方堵頭取出后斜剪斷，然后再插回柱子上；
----將20mL注射器連接于**親和柱上部，用5~10mL
pH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）或者去離子水平衡柱子，以1滴/秒的速度通過(guò)**親和柱，樣品提取液必須緩慢地連續(xù)地通過(guò)柱子（用注射器加以正壓或用真空泵施加負(fù)壓，也可以使用泵流操作架配合**親和柱）；
----準(zhǔn)確移取混勻提取液注入注射器中，調(diào)節(jié)針筒壓力使其以1滴/2秒的速度緩慢通過(guò)**親和柱；
----先用10mL 0.1%的吐溫20-PBS溶液清洗，再用10mL 10%甲醇-水清洗，（主要針對(duì)醬油、醋、飼料等顏色較深的樣品，其他可略去）；
----用20mL 水沖洗柱子，棄去流出液，流速2滴/秒，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體，保證柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體；
----準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速1滴/2~3秒，直至2~3mL空氣通過(guò)柱體，保證柱子內(nèi)沒(méi)有殘余液體。收集全部洗脫液待測(cè)。
【檢測(cè)方法】
（1）AFB1酶免試劑盒（蘇微）檢測(cè)
----用試劑盒中的樣品稀釋液以1:10稀釋洗脫液（1份洗脫液+9份樣品稀釋液），取50μL進(jìn)行測(cè)定。
注意：如果AFB1污染較嚴(yán)重，需要進(jìn)一步稀釋樣品，洗脫液*終必須稀釋到10%甲醇，詳見(jiàn)試劑盒說(shuō)明書(shū)。
（2）HPLC法檢測(cè)
----可參考GB/T 18979-2003。
【注意事項(xiàng)】
（1）黃曲霉**對(duì)人體有害，應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次氯酸鈉浸泡過(guò)夜。
（2）不要使用過(guò)有效期的**親和柱。
（3）**親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。
（4）使用前，**親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫（25℃左右）。
（5）按以上的提取過(guò)程，樣品通過(guò)柱子的實(shí)際體積等于1g 原物質(zhì)，分析方法的檢測(cè)限可以通過(guò)改變進(jìn)柱的樣品體積而改變。
（6）稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整，建議*低不少于5g樣。
（7）黃曲霉**對(duì)光線敏感，因此樣品及其提取液應(yīng)當(dāng)?shù)蜏兀?~8℃）、避光保存。
【保存期】
有效期為12個(gè)月。
生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。
【緩沖溶液配制】
pH7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）：
3gNa2HPO4.12H2O，0.25gNaH2PO4.2H2O，8.7gNaCl，用水定容至1L。
pH7.0磷酸鹽緩沖液（PBS）：
25mL 0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液與29.1mL 0.1 0.2mol/L的氫氧化鈉溶液混勻后，用水定容至100mL。
0.1%的吐溫20-PBS溶液：
取pH7.4的PBS溶液1L，加入100uL吐溫。
